Bien qu’elles ne puissent être vues à l’œil nu, les bactéries sont partout. Ils existent dans la nourriture, le sol, l’eau, les surfaces à l’intérieur de nos maisons et dans et sur notre corps. Les bactéries existent généralement dans les populations mixtes. L’isolement d’une bactérie spécifique d’autres espèces bactériennes dans un échantillon donné permet aux microbiologistes d’étudier sa structure et sa fonction, caractéristiques utilisées pour son identification. Les microbiologistes isolent fréquemment les bactéries en utilisant l’une des nombreuses techniques de plaques striées.
Sommaire de cette fiche pratique
Outils
Une boucle d’inoculation est utilisée pour transférer les micro-organismes. Il s’agit d’un fil de nichrome ou de platine avec une petite boucle circulaire à une extrémité. L’autre extrémité est droite et se glisse dans une poignée. Des boucles d’inoculation en plastique jetables sont également disponibles. Les bactéries ne peuvent être isolées que si elles se développent. Les microbiologistes cultivent des bactéries pour isoler les plaques de stries dans des boîtes de Pétri peu profondes et rondes remplies d’un milieu solide, appelé agar. La gélose imite l’environnement dans lequel les bactéries se développent naturellement. Les plats remplis de milieu sont stériles et munis d’un couvercle pour empêcher la croissance d’organismes indésirables. Pendant l’isolation de la plaque de striage, la boucle d’inoculation est stérilisée à plusieurs reprises dans la flamme d’un brûleur Bunsen.
Principe
La technique des plaques à stries est la méthode la plus populaire pour isoler des bactéries spécifiques à partir d’un échantillon contenant un mélange de micro-organismes. La technique dilue essentiellement le nombre d’organismes et réduit leur densité. Il permet aux microbiologistes de distinguer et d’isoler des colonies bactériennes individuelles. Une colonie est un groupe visible de bactéries. Toutes les bactéries d’une même colonie proviennent de la même cellule bactérienne. Par conséquent, les colonies individuelles sont des colonies « pures ». La colonie pure est transférée sur une autre plaque pour produire une culture pure composée d’un type de bactéries.
Procédure
Lorsqu’il est bien fait, l’isolement en plaques à rayures amincit un spécimen et permet à des cellules bactériennes individuelles de se développer en colonies isolées. Un microbiologiste commence par stériliser la boucle d’inoculation dans une flamme. Elle refroidit la boucle en la touchant à la gélose, puis plonge la boucle dans l’échantillon et l’étend d’avant en arrière pour couvrir une section de la plaque. Elle stérilise la boucle, la refroidit et inocule une deuxième section adjacente de la plaque en faisant glisser plusieurs fois la boucle à travers la première section et en couvrant la deuxième section d’un mouvement en zigzag. Cela permet de prélever un petit nombre de bactéries de la première section et de les transférer à la deuxième section. Le nombre de répétitions de cette procédure de base dépend de la méthode de la plaque à stries utilisée. Malgré la méthode, l’échantillon original est utilisé pour inoculer la première section de la plaque seulement.
Méthodes
Les méthodes des plaques de striage varient en fonction du nombre de sections de gélose striées. La méthode T-streak utilise trois sections : la moitié supérieure et deux sections inférieures de taille égale. L’inoculum initial est placé dans la moitié supérieure de la plaque. Les bactéries sont traînées de la section supérieure à l’une des sections inférieures, puis de cette section inférieure à l’autre. Dans la méthode des quadrants, quatre sections de taille égale sont striées. La méthode de striage continu consiste généralement à inoculer la moitié supérieure de la plaque, à la faire tourner de 180 degrés et à inoculer l’autre moitié de la plaque sans stériliser la boucle ou traîner les bactéries de la section précédente.
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