Les scientifiques utilisent des dilutions en série (une série de dilutions 1:10) pour calculer la densité de population des cultures bactériennes. Lorsqu’une goutte de culture contenant un petit nombre de bactéries est plaquée et incubée, chaque cellule sera théoriquement assez éloignée des autres cellules pour former sa propre colonie. (En réalité, certaines colonies peuvent être des descendants de deux cellules voisines, mais c’est rare dans les cultures diluées, et le nombre de colonies est donc une très bonne estimation du nombre de cellules transférées à l’origine sur la plaque. Comme la densité de population est inconnue, il faut utiliser une variété de dilutions pour obtenir une plaque avec un nombre approprié de colonies.
Étiqueter les six éprouvettes (contenant chacune 9 ml de milieu de croissance) de 1 à 6. Étiqueter les six plaques de gélose de 1 à 6. Utiliser une pipette et des embouts de pipette stériles de 1 millilitre (ml) pour transférer 1 ml de culture bactérienne dans le tube 1.
Bien mélanger et transférer 1 ml du tube 1 dans le tube 2 à l’aide d’une pipette et d’embouts stériles de 1 ml.
Répétez l’étape 2 pour les tubes restants, en transférant chaque fois 1 ml du tube le plus récemment utilisé au tube suivant.
Utiliser une pipette et des embouts stériles de 0,1 ml pour transférer 0,1 ml du tube 1 à une plaque de gélose. Flamber une tige de verre en forme de L et l’utiliser pour répartir la goutte uniformément autour de la plaque. Incuber la plaque pendant 48 heures à une température appropriée pour les bactéries utilisées. Différents types de bactéries ont des températures de croissance optimales différentes. Si vous ne pouvez pas trouver la température de croissance optimale à l’aide d’un matériau de référence, essayez d’incuber les plaques à -3,88 et 2,77 degrés C.
Répétez l’étape 4, en transférant chaque fois le liquide d’un tube à essai différent sur la plaque correspondante.
Observez les six planches et choisissez celle avec 30 à 200 colonies isolées.
Multiplier le nombre de colonies sur la plaque par 10 pour calculer le nombre de cellules par ml de culture à partir du tube de dilution utilisé.
Multiplier le nombre de l’étape 2 par 10^(numéro de plaque) pour calculer le nombre de cellules par ml de culture originale. La valeur de 10^(numéro de plaque) est le facteur de dilution de la culture utilisée pour innocenter cette plaque.
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