Lorsque l’on travaille avec la chromatographie liquide à haute performance (CLHP), un bon étalonnage est absolument essentiel pour assurer des résultats fiables et de qualité. L’étalonnage correct d’un instrument CLHP commence par l’élaboration d’un étalon d’étalonnage approprié. Dans la plupart des cas, l’étalonnage exige en fait une série d’étalons de concentration croissante afin de produire ce que l’on appelle une courbe d’étalonnage. Il s’agit d’une ligne tracée et d’une équation associée qui décrit la relation entre la concentration du produit chimique testé et la réponse du détecteur HPLC.
Déterminez le produit chimique que vous souhaitez tester pour l’utilisation de la CLHP (l' »analyte »). Par exemple, vous pourriez vouloir tester la teneur en fructose d’une série de boissons gazeuses, auquel cas le fructose serait l’analyte.
Obtenir une quantité de la substance chimique à analyser d’une pureté appropriée. Normalement, la pureté doit être supérieure à 99% et l’analyte doit être acheté auprès d’une société d’approvisionnement en produits chimiques de bonne réputation. Dans le cas du fructose, par exemple, vous achèteriez du fructose pur d’un vendeur de produits chimiques et non d’une épicerie.
Déterminez les concentrations maximales et minimales prévues de l’analyte dans les échantillons que vous avez l’intention de tester sur la CLHP. Dans le cas des boissons gazeuses, vous examinez les étiquettes des boissons et déterminez la teneur en fructose la plus faible et la plus élevée parmi les boissons que vous allez tester. Gardez à l’esprit que l’échantillon initial (la boisson gazeuse) peut être dilué ou manipulé pendant la préparation à l’analyse (selon la méthode HPLC utilisée) et que la concentration de l’analyte dans les échantillons effectivement injectés sur la HPLC peut être modifiée. C’est la concentration de l’analyte dans les échantillons tels qu’ils sont analysés sur la CLHP qui doit être prise en compte.
Déterminez le solvant dans lequel vous allez dissoudre votre analyte pour constituer des étalons de calibration. Ce solvant doit être capable de dissoudre correctement l’analyte sur une plage de concentration relativement large (au moins aussi élevée que dans les échantillons que vous avez l’intention de tester). De plus, ce solvant devrait idéalement être assez similaire à la « phase mobile » : le solvant utilisé pour transporter les échantillons à travers l’instrument HPLC.
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