Quels sont les inconvénients de la CLHP ?

La chromatographie liquide à haute performance (CLHP) est une technique de laboratoire utilisée pour séparer et identifier les composés. Il s’agit d’un type de chromatographie sur colonne qui repose sur différentes polarités de composés dans une solution afin de les séparer. La CLHP diffère de la chromatographie sur colonne standard parce qu’elle utilise la pression pour forcer la solution à travers la colonne plus rapidement, et produit donc des résultats plus rapides et parfois plus précis. Le but est de séparer les composés dans la colonne et de les faire sortir séparément.

Coelution

En raison de la vitesse de la CLHP et de sa dépendance aux différentes polarités des composés, deux composés de structure et de polarités similaires peuvent sortir de l’appareil de chromatographie en même temps ou presque en même temps. C’est ce qu’on appelle la coelution. La coelution rend difficile la détermination exacte de la portion du mélange éluée et à quel moment.

Composés adsorbés

HPLC utilise typiquement une colonne de verre remplie de perles faites de différents matériaux. Les mélanges forcés à travers la colonne ont des produits chimiques qui se lient avec des forces différentes aux billes. La résistance de la liaison, qui dépend de la similitude de polarité, détermine combien de temps le produit chimique se liera à la perle avant d’être libéré. Certains composés se lient si fortement qu’ils ne sont essentiellement jamais libérés des billes dans la colonne et ne sont jamais mesurés dans la solution sortant de la colonne.

Coût

Les techniques typiques de séparation en laboratoire impliquent la mise au point d’un essai ou d’une méthode de séparation, puis la mise en œuvre de cet essai pour séparer les composés individuels d’une solution. Cependant, il en résulte généralement des solutions multiples qui doivent également être soumises à des procédures, ce qui entraîne une augmentation exponentielle de la complexité. Bien que la CLHP puisse souvent simplifier et accélérer ce processus, le coût de développement d’un appareil CLHP peut devenir énorme. La mise au point d’un appareil CLHP, bien que beaucoup plus efficace, est beaucoup plus coûteuse que la mise au point d’autres essais de séparation des composés. Il n’est donc pas financièrement viable pour de nombreux petits laboratoires privés.

Complexité

La CLHP n’est pas seulement utilisée pour séparer des composés simples, mais aussi pour isoler des protéines spécifiques d’un mélange cellulaire. Dans ce cas, les billes de la colonne sont généralement recouvertes d’un anticorps spécifique de la protéine que vous devez collecter. Les protéines lient les anticorps et la solution restante passe à travers la colonne, puis les protéines sont libérées à l’aide d’une autre solution et collectées. Un technicien hautement qualifié doit surveiller la colonne en tout temps et s’assurer que le processus se déroule exactement comme prévu.