Les avantages d’un frottis teinté direct

L’identification des micro-organismes joue un rôle important dans le traitement des maladies. L’examen microscopique d’un frottis taché est généralement la première étape de la détection et de l’identification des bactéries pathogènes. Bien que la procédure ne permette pas une identification définitive, elle fournit des indices importants concernant la taille, la forme et la composition structurelle de l’organisme. Les taches sont directes ou indirectes. Lorsqu’une teinture directe est utilisée, elle peut être simple ou différentielle. Malgré ses limites, la coloration directe présente de nombreux avantages.

Préparation du frottis

La première étape de la coloration bactérienne directe est la préparation d’un frottis. Les cellules d’une culture ou d’un échantillon sont étalées en film mince sur une lame de microscope en verre, séchées et fixées à l’aide de chaleur ou d’un fixateur chimique. La fixation du frottis permet d’attacher les bactéries à la lame et d’éviter qu’elles ne soient emportées par le lavage pendant la procédure de coloration. Les frottis doivent être suffisamment fins pour permettre l’observation des cellules individuelles et suffisamment fixés pour permettre des lavages répétés pendant la procédure de coloration.

Taches

En raison de leur forte teneur en eau, les microbes sont presque incolores. La coloration les met en valeur et révèle leurs différentes caractéristiques. Les taches sont généralement des sels composés de particules chargées, appelées ions. Lorsqu’il est mélangé à de l’eau, un sel se dissocie en cations chargés positivement et en anions chargés négativement. Les taches sont des sels dont les cations ou les anions sont colorés. Selon le type d’ion qui porte la couleur, les taches microbiologiques courantes sont soit basiques, soit acides. Les teintures basiques contiennent des cations colorés et des anions incolores. Le bleu de méthylène, la fuchsine basique et le violet cristal sont des exemples de taches basiques. Les taches acides ont des anions colorés et des cations incolores. Les exemples incluent l’éosine, le rouge Congo et la nigrosine.

Principe

Les bactéries portent une légère charge nette négative. Par conséquent, ils attirent et lient les taches de base chargées positivement. Parce que les bactéries elles-mêmes retiennent le colorant, le procédé est une méthode de coloration directe. Une tache directe peut être simple ou différentielle. La coloration simple utilise un seul colorant pour révéler la taille, la forme et la disposition des bactéries. Une coloration différentielle, comme la coloration Gram, utilise deux colorants de base de couleur différente pour distinguer les types de bactéries en plus de leurs caractéristiques physiques. Les techniques de coloration indirecte ou négative utilisent des taches acides. Les bactéries repoussent le colorant et restent incolores sur le fond qui retient les taches.

Avantages

La coloration directe des cellules bactériennes est la technique la plus couramment utilisée pour visualiser les bactéries. Il est peu coûteux, simple et relativement rapide. Cette technique permet aux professionnels de la santé d’obtenir des résultats le jour même, ce qui peut sauver des vies lors du diagnostic et du traitement de certaines infections, comme la méningite bactérienne. Les frottis directs sont des préparations permanentes qui peuvent être réexaminées ultérieurement, si nécessaire. Comme la coloration directe tue les bactéries, le risque d’infection lié à la manipulation du frottis est réduit.