Les taches nordiques sont surtout un outil de recherche sur l’ARN (acide ribonucléique). L’ARN est extrait de l’échantillon et passe sur un gel pour l’électrophorèse qui est ensuite transféré sur une membrane filtrante. Le type d’ARN utilisé dans les taches nordiques est l’ARNm (ARN messager), le produit de la transcription de l’ADN.
L’interprétation des résultats du Northern blot comprend l’incubation du blot et son lavage pour enlever toute sonde non liée afin de visualiser la sonde liée.
Transférer le brin d’ARNm du gel à la membrane. Incuber le brin avec une solution de sonde homologue à l’ARNm que vous utilisez. La sonde contient un indicateur de votre ARN d’intérêt afin de visualiser plus tard. Si les paires de base de la sonde sont complémentaires, la sonde se fixera à votre ARNm.
Laver le brin d’ARNm avec des tampons de lavage à basse et haute stringence sans RNase pour enlever toute sonde non liée.
Cherchez un groupe qui se forme. Si une bande se forme, cela indique que l’ARNm est homologue à la sonde. Si aucune bande ne se forme, cela indique qu’elle n’est pas homologue. Ces résultats indiqueront dans quel type de cellules ou de tissus votre ARN d’intérêt est le plus abondant.
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