La biologie moléculaire et la bactériologie utilisent des plaques de gélose pour cultiver des micro-organismes tels que des bactéries à des fins d’expérimentation. La gélose est l’agent qui solidifie, ou gels, un milieu nutritif liquide nécessaire à la survie et à la croissance du micro-organisme. Une fois transférées sur une plaque de gélose, les bactéries se développent en colonies distinctes (si elles sont cultivées à de faibles concentrations) ou en frottis (si elles sont cultivées à de fortes concentrations) et peuvent être récoltées pour analyse. Les biologistes préparent des plaques de gélose, car le processus nécessite l’accès à des réactifs et à des machines de laboratoire et une bonne compréhension de la biologie moléculaire et des techniques stériles.
Mettre l’équipement de protection approprié, y compris des gants, une blouse de laboratoire et un masque facial, et décontaminer toutes les surfaces. Travailler à côté d’un brûleur Bunsen ou, de préférence, dans une hotte à flux laminaire stérile. Cela empêche les contaminants en suspension dans l’air de tomber dans la gélose.
Retirer la pile de boîtes de pétri de leur emballage, mais mettre de côté pour réemballer les boîtes de gélose. Étiqueter la surface externe du plat (pas le couvercle) avec le type de gélose et la date de préparation. Disposer les plaques en une seule couche avec les couvercles enlevés pour faciliter le versement de la gélose.
Mélanger la bactério-tryptone, l’extrait de levure et l’agarose, puis ajouter la solution d’hydroxyde de sodium (NaOH). Ajouter de l’eau distillée stérile pour obtenir 1L de milieu nutritif. Transférer cette solution dans une bouteille en verre d’un volume d’au moins 1,5L. Visser librement le couvercle de la bouteille et étiqueter la date de préparation et le nom du support. Placer une bande de ruban autoclave sur la bouteille et l’autoclaver pendant 25 minutes. Laissez la bouteille refroidir jusqu’à 45 degrés Celsius (ou elle durcit prématurément) mais pas plus de 50 degrés Celsius. Vous pouvez conserver les bouteilles de gélose refroidie et solidifiée à 4 degrés Celsius, puis les réchauffer jusqu’à ce qu’elles soient liquéfiées. Si cela est nécessaire pour votre expérience ou votre souche de bactéries, ajoutez le type et la quantité appropriés de suppléments tels que des antibiotiques. Si le support est trop chaud, les suppléments seront détruits, donc vérifiez soigneusement la température du support avant de continuer.
Verser un volume suffisant de gélose pour remplir le plat à moitié pendant que la gélose est encore chaude et liquéfiée. Veillez à ce que la surface soit entièrement couverte. Ne versez pas une quantité excessive et ne laissez pas la gélose atteindre le haut du plat. Maintenir les plaques dans une atmosphère stérile en permettant au brûleur Bunsen ou à la hotte à flux laminaire de fonctionner en continu. Laisser les plaques prendre, puis remplacer les couvercles.
Sécher les plaques de gélose pendant environ 30 minutes à une heure dans un four réglé à 37 degrés Celsius au maximum. Alternativement, vous pouvez les laisser dans la hotte à flux laminaire pendant trois minutes ou sur un banc de laboratoire décontaminé dans une zone à faible trafic qui n’a pas de courant d’air pendant un jour ou deux. Le séchage des plaques empêche toute solution bactérienne placée sur la surface de la gélose de se diluer et de glisser, au lieu de former des colonies qui adhèrent à la gélose.
Rangez soigneusement les assiettes dans l’obscurité et à 4 degrés Celsius. Empilez les plaques de gélose séchées avec leur fond vers le haut pour vous permettre de voir clairement les étiquettes et d’empêcher les micro-organismes et les débris de tomber sur la surface de la gélose et de les contaminer. Remettre les plats dans leur emballage, les recouvrir d’une feuille d’aluminium et fermer l’emballage avec du ruban adhésif. Étiqueter les plaques emballées avec leur contenu et la date de préparation. Vous pouvez conserver les assiettes jusqu’à deux mois et vous devriez les jeter par la suite.
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