Pendant la chromatographie en couche mince, un technicien dépose des taches d’un mélange chimique sur une plaque plate recouverte d’une couche de matériau absorbant, puis pose la partie inférieure de la plaque dans un solvant. Au fur et à mesure que le solvant remonte la plaque, les produits chimiques contenus dans le mélange remontent avec lui à des vitesses différentes, de sorte qu’ils se séparent. Ce test permet de déterminer quels produits chimiques se trouvent dans un mélange en comparant les taux de déplacement des inconnus à des normes connues. Toutefois, les résultats peuvent être influencés par de nombreux facteurs.
Sommaire de cette fiche pratique
Facteurs de rétention
Le facteur de rétention d’un produit chimique pendant la chromatographie en couche mince est une mesure de la distance à laquelle il remonte la plaque en réponse au mouvement du solvant. Comme le mouvement absolu du produit chimique dépendra de la distance à laquelle le solvant a été autorisé à se déplacer, les valeurs du facteur de rétention sont calculées par rapport au degré de mouvement du solvant. Le facteur de rétention d’un produit chimique est la distance verticale parcourue par le produit chimique depuis l’endroit où il a été appliqué à l’origine sur la plaque, divisée par la distance parcourue par le solvant — mesurée à partir du même point de départ.
Plaque de chromatographie en couche mince
La plaque de chromatographie en couche mince elle-même peut affecter la valeur du facteur de rétention obtenue pour un produit chimique donné. Les plaques de chromatographie en couche mince peuvent être revêtues d’une variété de solides absorbants ; le plus souvent de la silice ou de l’alumine. Puisque le facteur de rétention est basé sur l’affinité relative du produit chimique pour l’absorbant par rapport au solvant, le changement de l’absorbant peut modifier considérablement le facteur de rétention. De plus, l’épaisseur et l’uniformité de la couche d’absorbant peuvent varier d’une plaque à l’autre, surtout si elles sont faites à la main, ce qui est parfois le cas. Ces deux facteurs peuvent également modifier la valeur du facteur de rétention des produits chimiques.
Solvants
Puisque le solvant transporte le produit chimique vers le haut de la plaque, le solvant utilisé aura également un impact substantiel sur la valeur du facteur de rétention du produit chimique. Un solvant qui a une interaction plus forte pour un produit chimique particulier surmontera plus facilement toute affinité du produit chimique pour la couche absorbante, et déplacera ce produit chimique plus loin dans une période de temps donnée. Les mélanges de solvants peuvent également avoir des effets différents selon la proportion de chaque solvant.
Autres facteurs
Il y a quelques autres facteurs qui peuvent influer sur le facteur de rétention dans certains cas. La température du solvant et de la plaque peut varier légèrement, car, par exemple, le solvant peut souvent mieux dissoudre les produits chimiques qu’il transporte à des températures plus élevées. La technique du technicien lors de l’application de l’échantillon sur la plaque peut également modifier le facteur de rétention. L’un des effets possibles est que l’application d’une trop grande quantité d’échantillon entraînera le déplacement de grandes bandes diffuses de produits chimiques vers le haut de la plaque, ce qui rendra difficile la mesure précise de la distance sur laquelle le produit chimique a été transporté.
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